蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱详细说明
? 蜂王浆是世界上公认的***可供人类直接服用的高活性成分的超级营养食品。?10- 羟基-2- 癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中特有的一种不饱和脂肪酸,由于这种酸在自然界的其它物质中没有,只存在于蜂王浆中,所以也称为王浆酸。分离出的纯王浆酸呈白色晶体,在新鲜的蜂王浆中多以游离形式存在,性质比较稳定,具有很好的**、抑菌、抗疲劳、**老作用和***、抗放射的功能,为此许多保养食品均添加有蜂王浆。因此作为评价蜂王浆及其制品***劣的主要指标之一的10-HDA 含量测定显得尤其重要。至今为止,10-HDA 含量测定有薄层扫描法、分光光度法、气相法、液相法,且多见于分析蜂王浆中的10-HDA 。薄层扫描法、分光光度法专属性和准确性较差,气相法处理繁琐,目前**为通用的是H P L C法。液相法处理简单、结果准确,本公司基于以上情况,建立了超声提取、冷藏沉淀后,用对羧基苯甲酸乙酯做内标,反相液相色谱法测定蜂王浆及其制品中1 0 -H D A 含量的方法,取得了令人满意的结果。 一、主要性能特点:??? 1)、蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱仪LC-3000C整套系统由P3000高压输液泵(二元梯度)、UV3000分光检测器、分析型动态高压混合器、进样阀、溶剂托盘、色谱柱、反控色谱工作站软件等组成;安装、调试及使用都非常简单。? 2)、P3000高压输液泵是以CPLD技术为**,由单片机控制的高精密输液泵系统。全数字频率发生系统,**的马达驱动系统友好的人机显示界面使操作很方便,**的泵头及单项阀设计思路,融汇了当今世界上**的经验,使该系统在各种条件下都能保证输液的精度及重复性。? ? 3)、UV3000是一种分光检测器,可以匹配任何输液泵,适用于化学分析、农*、制*、化工等领域有着广泛的应用。采用了全数字、高集成化设计理念,**降低仪器的噪声;基于数字信号传输和处理,该检测器的信号可直接输入到计算机的串行口进行采集,完全甩掉了传统仪器必须使用的数据采集卡! ? ? 二、仪器主要配置和检测分析条件: (1).?主要仪器配置: 1、LC-3000高效液相色谱仪;2、色谱柱:C18,250*4.6*10 或250*4.6*5 3、高速离心机(大于4500r/min;50ml)4、超声波震荡仪;5、涡旋混合器; 6、分析天平(万分之一);7、溶剂过滤器(带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵); (2)、主要试剂: 1.纯净水(二次蒸馏水)? 2.甲醇:分析醇? 3.乙醇:优级纯?? 4.内标物:对羟基苯甲酸甲酯含量99.0%?? 5.10-HAD标准品:99.0%以上。使用前应在放有浓**的减压干燥器内减压干燥24h 6.10-HAD标准溶液:取干燥后的10-HAD标准品约25mg,精密称定,加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。7.盐酸(C=0.03mol/L):量取0.1mol/L盐酸100ml,加入200ml重蒸馏水中。 (3).色谱条件: 色谱柱为Kromasil C18 柱,流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2,流速1.0ml/min,对羧基苯甲酸乙酯作内标,检测波长210nm。本法简单、快速、准确,重现性好,回收率高(97.6%~101.8%)。 (4).样品处理 样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀,取约0.5g,置于已称定的50ml容量瓶中,精密称定,加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml,置漩涡混合器上混合使样品溶解,加无水乙醇30ml,边加边轻轻摇动,再精密加入内标溶液10ml,并用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,立即置超声波中超声15min,或置漩涡混合器上振荡15min,取出,在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定,应放置在冰箱中冷藏待测。