实验原理 本试剂盒为一种直接竞争ELISA试剂盒。在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的去氢表雄酮与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的去氢表雄酮多克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被出去；再加入显色液，结合的酶标记抗体是无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转化为黄鳝，在450nm处测量，样品吸光值与样品中的去氢表雄酮含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中去氢表雄酮含量。 ? ? 试剂盒技术指标 检测限：? 0.1ppb 检测范围：0.1 ppb ? 62.5ppb ? ? 交叉反应： Androsterone（雄甾酮）???????? 0.1％ Androstenedione(雄烯二酮)?????? 0.25％ Etiocholanolone（本胆烷醇酮）?? 0.1％ Testosterone（睾丸酮）????????? 0.01％ Cortisol（皮质醇）????????????? 0.01％ Progesterone（孕酮）??????????? 0.25％ Estradiol（雌二醇）???????????? 0.01％ ? ? 试剂盒组成及试剂配制 1.???????? 酶标板：96T/8孔 2.???????? 标准品溶液：0ppb,0.1ppb,0.5ppb,2.5ppb,12.5ppb,62.5ppb（1ml/瓶） 3.???????? 酶标记物液：??? 7ml/瓶。 4.???????? 底物缓冲液：??? 7ml/瓶。 5.???????? 底物液：??????? 7ml/瓶。 6.???????? 终止液：??????? 7ml/瓶 7.???????? 20倍浓洗涤液：? 50ml/瓶。 ? ? 样品前处理方法： ? 1. 胶囊类样品：取片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，称取0.1000g试剂（准确至0.001g）于离心管中，加入1ml甲醇使用超声提取5min后以3000r/min离心3min。准确取0.1ml试样定容至1ml，检测时加入50微升进行检测。 2. 茶叶样品：用研钵研碎茶叶样品，称取1g研碎的样品，加入1ml甲醇，漩涡混匀5min后，放振荡器上震荡15min；3000r/min离心3min，转移出上清，取0.1ml定容至1ml。取50μL进行分析。 3.血清样品：将血清3000r/min离心3min，取上清50μL进行分析。 ? ? 操作步骤 1.? 加试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温下平衡30min以上。 2.? 加样：加入50μL标准品或50μL待测样品，然后每孔加入50μL酶标记物，轻轻混匀，室温下孵育30 min。 3? 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。。 4???????? 显色：每孔加入底物缓冲液50μl，再加底物液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色10min。。 5．测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在20min内读完数据），测定吸光度值。 ? ? 结果判定 ??以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 ? ? 注意事项 1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。 2、洗板拍干后应立即进行下一步操作。 3、混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。 4、反应终止液为2M**，避免接触皮肤。 5、将不用的微孔板放进自封袋重新密封 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 6、不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。 7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。 ? 储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒