一、原理 本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被抗体，样本中的残留物氯霉素和氯霉素酶标记物抗原竞争微孔条上预包被的抗体，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物氯霉素的含量。 ? 二、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度：???????? 0.1ppb 样本定量检测下限?????? 蜂蜜? 0.1 ppb 牛奶? 0.05 ppb??? 鸡肉/鸡肝、猪肉/猪肝、虾、鱼? 0.05 ppb?????????? 交叉反应率 氯霉素?? ? 100 ％ 甲砜霉素?? < 0.1％ 氟甲砜霉素 < 0. 样本回收率 鸡肉/鸡肝、猪肉/猪肝、虾、鱼? 80％±20％ 蜂蜜???????????????????????? 75％±15％ 牛奶???????????????????????? 80％±20％ ? 三、?试剂盒组成 1．微量测试孔：??????? 96T/8孔 2．标准品液：（1mL/瓶）0 ppb? 0.05 ppb? 0.15 ppb?? 0.45 ppb?? 1.35 ppb? 4.05 ppb 3．酶标记物????????? 7 mL 4．底物缓冲液破????? 7 mL 5．底物液??????????? 7 mL 6．终止液??????????? 7 mL 7．20倍浓缩洗涤液?? 50 mL? 加蒸馏水稀释到1000 mL 8．20倍复溶液?????? 12 mL? 加蒸馏水稀释到240 mL ? ? 四、样本前处理步骤 1.??????**（鸡肉，鱼肉，虾肉，猪肉）前处理方法 将样品匀质，称取样品3g，加入3 mL蒸馏水，震荡均匀，再加入6 mL乙酸乙酯，震荡10min。5000r/min离心10min，吸取上层2 mL，40℃旋转蒸发至干，加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL复溶液复溶。去除上层正己烷，取下层清液50μL待测。 2.牛奶，牛初乳 溶液1：0.36M亚铁**钾溶液。称取152.06g亚铁**钾，定容至1L。 溶液2：1.04M**锌溶液。称取299.01g**锌，定容至1L。 称取样品9.6mL，分别加入溶液1和溶液2各200μL，震荡均匀，5000r/min离心10min。吸取上清3mL至另一离心管中，加入6mL乙酸乙酯，震荡10min，5000r/min离心10min。吸取上层2mL，40℃选择蒸发至干。加入1mL正己烷溶解干燥物，再加入1mL复溶液复溶。去除上层正己烷，取下层清液50μL待测。 3.肝脏（猪肝） 称取样品3g，再加入6mL乙酸乙酯，震荡10min。于80℃左右热水中水浴8min，5000r/min离心10min，吸取上层2mL，40℃选择蒸发至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL复溶液复溶。去除上层正己烷，取下层清液50μL待测。 4.鸡蛋 称取样品3g，加入6 mL乙酸乙酯，震荡10min。于80℃左右热水中水浴8min，5000r/min离心10min。吸取上层2 mL，40℃选择蒸发至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL复溶液复溶。去除上层正己烷，取下层清液50μL待测。 ? 注意： 复溶时一定要先加入正己烷溶解干燥物，再加入PBS复溶。震荡过程不宜太剧烈，防止乳化。 ? 五、操作步骤 1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷冻。 3． 加标准品/样本50μL /孔，然后加入酶标高物50μL /孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37℃条件下反应25 min（室温反应30min）。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5． 显色：每孔加入底物缓冲液50μL，再加底物液50μL，轻轻振荡混匀，37℃或室温环境避光显色10min。 6． 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450nm处（在20min内读完数据），测定吸光度值。 ? 六、 结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标，以氯霉素标准品浓度（ng/mL）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际浓度。 ? 七、 注意事项 1.终止液为2M**，避免接触皮肤。 2.不要使用已过有效日期的孔雀石绿检测试剂盒；不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。 3. 0标准液的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。 4.显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。 ? 八、储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。