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沙丁胺醇ELISA试剂盒

  • 产品价格:面议
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  • ***更新:2016-12-30 11:30:54
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沙丁胺醇ELISA试剂盒详细说明

一、原理 ?? 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿、**、饲料中的沙丁胺醇,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免*化学反应的原理来进行的,样本中的沙丁胺醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗沙丁胺醇抗体,再加入酶标二抗,用TMB底物显色,样品中的沙丁胺醇含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出沙丁胺醇含量。 ? 二 、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度:0.1 ppb 检测下限 **样本(鸡肉/肝、猪肉/肝)? ???? 1.0 ppb 猪尿??????????????? ????????????? 0.1 ppb 交叉反应率 沙丁胺醇(Salbutamal)????????????? 100%? 克伦特罗(Clenbuterol )??????????? ?10%? 莱克多巴胺(Ractopamine)???????? < 0.1%? 肾上腺素(Adrenalin)????????????? < 0.1%? 去甲肾上腺素(Noradrenalin)?????? < 0.1%? 异丙肾上腺素(Isoporterenol)?????? < 0.1%?? 样本回收率 **样本(鸡肉/肝、猪肉/肝)?????? 90±20% 猪尿???????????????????????????? 100±20% ? 三、试剂盒 组 成 1. 酶标板:??????????? 96T/8孔 2. 标准品液::  0 ppb、0.1 ppb、0.4 ppb、1.6 ppb、6.4 ppb、25.6 ppb(1mL/瓶) 3. 抗体工作液????????? 1瓶(7 mL) 4. 酶标记物:????????? 1瓶(12 mL) 5. 底物缓冲液:??????? 1瓶(7 mL) 6. 底物液: ?????????? 1瓶(7 mL) 7. 终止液:??????????? 1瓶(7 mL) 8. 20倍浓缩洗涤液:? ? 1瓶(50 mL)????? 加蒸馏水稀释到1000 mL 9. 样品稀释液:??????? 1瓶(12 mL)????? 用于稀释尿样 ? 四. 样品处理 尿样:(稀释倍数为2) 先加入25μL样品稀释液,再加入25μL尿样到微孔板中,混合均匀。浑浊尿样以4000 rpm离心5 min,取上清(清亮部分)。 猪肝、猪肉等** ??前处理配制的溶液 配液1:0.5M盐酸溶液 ?????????量取41.5ml浓盐酸加入去离子水定容到1000 ml 配液2:8%氯化钠溶液 ???????? 称取80.0g氯化钠,加1000ml去离子水溶解混匀 配液3:提取液 ???????配液1:配液2=1:4比例混合 配液4:1M氢氧化钠溶液 ??????? 称取20.0g氢氧化钠 1.?? 称2±0.05 g**放入15ml的离心管中,加入6 mL 提取液,充分摇匀后放置5-10 min; 2.?? 室温4000 r/min 以上离心5 min; 3.?? 移取1ml 上清液到2ml离心管中,加入45μL配液4溶液,混匀,调整PH值7-8。 4.? 取50μL下层进行分析。 样本稀释倍数:4 ? 饲料(稀释倍数10) 1.用研钵研碎饲料,称1 g研碎的饲料样品加入10 mL 0.01 M的盐酸,充分混合5 min。2.检查pH值是否在6.5-8之间,否则用氢氧化钠或盐酸调节。 3.3500 rpm离心5 min,转移出上清液(如上清液仍然浑浊可提高转速或用滤纸过滤)。4.吸取50μL进行检测。 ? ? 五、操作步骤 1. 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2. 按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8 ℃,不要冷冻。 3. 加标准品/样本50 μL /孔,然后加入抗体工作液50 μL /孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,37 ℃反应30 min。 4. 洗板4-5次,每次浸泡30秒,拍干。 5.加入酶标记物100 μL /孔,用封板膜盖板,37 ℃反应20 min。 6. 洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。 7. 显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL,轻轻振荡混匀,37 ℃环境避光显色10 min。 8. 测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450 nm处(在20 min内读完数据),测定吸光度值。 ? 六、结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标,以沙丁胺醇标准品浓度(ng/mL)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中沙丁醇实际浓度。 ? 七、注意事项 1. 终止液为2 M**,避免接触皮肤。 2. 不要使用已过有效日期的孔雀石绿检测试剂盒;不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用,以免降低灵敏度。 3. 0标准液的A450nm<0.6时,表示试剂可能变质,请勿使用。 4. 显色剂变蓝,表明已变质,请勿使用。 ? 八、储藏条件和保质期 储藏条件:试剂盒于2-8℃保存,不要冷冻。 保 质 期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒

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